Farklı Çay Ekstraktlarının Antioksidan, Antibakteriyal Etkileri ve Fenolik Madde
Dagılımının HPLC ile Belirlenmesi

Toplam Polifenol tayini

Toplam polifenol analizi spektrofotometrik Folin-Ciocalteu yöntemine göre (Obanda ve Owuor, 1997) yapılmıstır. Bu analiz için standart gallik asit çözeltisinin 0.005-0.05 mg/ml aralıgındaki 9 farklı konsantrasyonu ile bir kalibrasyon egrisi elde edilmistir (R2=0.99).

Sonuçlar elde edilen egrinin regresyon esitliginden yararlanılarak hesaplanmıs ve mg gallik asit esdegeri (GAE) olarak ifade edilmistir. Bu yöntemde 100 μg/ml’ye saf su ile seyreltilmis 1 ml çay ekstraktı 1 ml (3 kez su ile seyreltilmis) Folin-Ciocalteu reaktifi ile karıstırılmıstır. 5 dakika sonra bu karısıma 2 ml (% 35’lik) doygun sodyum karbonat çözeltisi ilave edilerek iyice karıstırılmıs ve 2 ml su ile 6 ml’ye seyreltilmistir.

Elde edilen karısım 30 dakika karanlıkta bekletildikten sonra olusan mavi rengin absorbansı spektrofotometrede 700 nm’de okunmuştur.


Antioksidan Aktivite Tayini


Çay örneklerinin antioksidan aktivitesi, DPPH yöntemi (Katalinic et. al. 2004; Atoui, 2005) kullanılarak belirlenmistir. Bu amaçla, otomatik pipet yardımıyla 50 μl çay ekstraktından (200 μg/ml) alınarak 1950 μl 6x10-5 molar DPPH radikali (metanolde hazırlanmıs) ile karıstırılmıstır. Kontrol olarak saf su kullanılmıstır. Reaksiyon karısımı vorteks karıstırıcıda karıstırılıp oda sıcaklıgında 60 dakika süreyle karanlıkta bekletilmistir.

Sürenin bitiminde 7 karısımın absorbansı spektrofotometrede 517 nm’de metanole karsı okunmustur. Antioksidan aktivite (% AA), asagıdaki esitlikten (Yen and Duh, 1994) yararlanılarak hesaplanmıstır.

Abs-kontrol - Abs-örnek
AA (%)=------------------------ x 100
Abs-kontrol


Formülde Kontrol Abs örnek içermeyen DPPH çözeltisinin absorbansını, örnek Abs örnek içeren DPPH çözeltisinin absorbansını göstermektedir. Aynı kosullar altında referans antioksidan olarak askorbik asit çözeltisinin 0-150 μg/ml aralıgındaki farklı konsantrasyonları ile bir kalibrasyon egrisi elde edilmistir.

Örneklerin AA’si askorbik asit esdegerine dönüstürülerek g askorbik asit esdegeri (AEAA)/100 g kuru ekstrakt olarak açıklanmıstır. Yüksek AEAA degerleri örnek AA’sinin yüksekligini göstermektedir.