EA-IRMS İLE BALDA C13/C12 ORANLARI VE %C4 ŞEKER ANALİZİ

1.Amaç ve Kapsam
Bu analiz, dışarıdan C4 şekeri katılarak üretilen veya C4 şekeri ile beslenen arılardan elde edilen ballarda uygulanan analiz yöntemini kapsamaktadır.

2.Prensip
Ham bal ve bu baldan elde edilen protein çökeltisi tam olarak yakıldıktan sonra ortaya çıkan CO2 gazının bünyesindeki C atomunun C13/C12 oranının kütle spektrometresi ile tespit edilmesi ve bu değerlerden %C4 şeker oranının hesaplanması esasına dayanır.

3.Alet ve Ekipmanlar
• Alümina reaktör
• Kuartz reaktör
• Tin kapsül
• Pens seti
• 50 ml’lik santrifüj tüpleri
• Santrifüj
• Etüv
• 0,01 mg hassasiyetteki analitik terazi
• 0,1 gr hassasiyetindeki analitik terazi
• Vorteks
• 100 ml’lik balon jojeler
• He tüpü
• tüpü
• tüpü
• Sıcak su banyosu

4.Kimyasal Maddeler
• %10’luk : 10 gr sodyum tunstat alınarak 100 ml su içerisinde çözündürülür.
• 0,335 M : 1,88 ml derişik sülfürik asit alınarak 100 ml’ ye seyreltilir.

5.İşlem
5.1.Standart Hazırlama
Yaklaşık 1mg sucrose tin kapsül içerisine alınarak katlanmalıdır.Her oluşturulan batch öncesi ve sonrası 2’şer olacak şekilde hazırlanır.
5.2 Örnek Hazırlama
5.2.1 Bal Örneği Hazırlama:
Yaklaşık 1mg ham bal tin kapsül içerisine alınarak tin kapsül kapatılır. İşlem 3 paralel yapılmalıdır.
5.2.2. Protein Çökeltisi Hazırlanması
• 10-12 gr ham bal 50 ml’lik bir santrifüj tüpüne alınır.
• 4 ml saf su içerisinde çözündürülür.
• 2 ml eklenir.
• 2 ml çözeltisi eklenir.
• 80 deki su banyosunda bulutlanma ve sonrasında çökelti olana kadar beklenir. Bulutlanma olmazsa 2 ml daha çözeltisi ilave edilerek çökelti oluşana kadar su banyosunda bekletilmelidir.
• Çökelti oluşumundan sonra santrifüj tüpündeki numune 50 ml’ ye tamamlanır.
• 1500rpm/10 dak santrifüj edilir.
• Berrak kısım uzaklaştırılır.
• f, g ve h basamakları 5 kez tekrarlanır.
• Çökelti 70 de tamamen kurutulur.
• Kurutulmuş protein çökeltisinden yaklaşık 1 mg tin kapsüle konarak tin kapsül katlanır. Bu işlem 3 paralel yapılmalıdır.
5.3. EA-IRMS Analizi
Elemental analizörün numune kabına 2 adet sucrose (In House Reference Material, IHRM ), tek numuneye ait 3 adet bal numunesi, 3 adet protein numunesi, 2 adet Sertifikalı Referans Materyal (CRM) ve 2 adet sucrose (IHRM) konarak Batch başlatılır.

6.Hesaplama
Aynı numuneye ait bal ve protein numunelerinin C13/C12 oranları Sucrose C13/C12 oranlarına göre düzeltilerek ortalamaları alınır.

%C4 şeker =[( )]


%C4 şeker : Bal içerisindeki C4 şeker yüzdesi

Bal numunelerinin düzeltilmiş C13/C12 değerlerinin ortalaması
: Protein numunelerinin düzeltilmiş C13/C12 değerlerinin ortalaması
(-9,7): Mısır şurubunun ortalama C13/C12 değeri