Konu: Elektroforez metodları

ELEKTROFOREZ METOTLARI
I.GENEL BAKIŞ
Elektroforez, elektriksel bir alanın etkisi altında likid bir ortamda yüklü solüt veya
partiküllerin göçüdür. Elektroforez tüm partikül türlerinin göçünü sağladığından
iyontoforez terimi özellikle küçük iyonların göçünü ifade eder.
Protein çalışmalarında kullanılan ilk elektroforez yöntemi Tiselius tarafından 1937’de
tanımlanan serbest solüsyon elektroforezi, frontal elektroforez veya “moving
boundary” elektroforezidir. Tiselius bir elektrolit solüsyonunda çözünmüş olan
proteinleri, protein-elektrolit solüsyonunun bulunduğu “U” şeklindeki kuartz bir
borunun içinden elektrik akımı geçirerek ayırmıştır. pH 7.6’da albumin, α, β ve
γ olarak isimlendirilen 4 serum protein fraksiyonunu saptamış ve bu bandların sınırları
arasındaki absorbans değişikliğini optik olarak ölçmüştür. Bu teknik hala elektroforetik
mobilite ve protein-protein etkileşimi ile ilgili araştırmalarda kullanılmaktadır; fakat,
klinik laboratuvarlarda rutin çalışmalar için kullanılmaz, kompleks bir araç gerektirir,
teknik zordur ve 0.5 mL örnek gerektirir.



Dosya türü : pdf

Şifre : www.forumfood.net

Elektroforez:Karışımda bulunan maddelerin tümü veya bir kaçı iyonlaşma özelliğine sahip ise bu karışım bir elektrik alanına konduğu taktirde bir dereceye kadar ayrılma olacaktır. Bilindiği üzere bir elektrik alanına konulduklarında iyonlar hareket ederler. Bu hareketin hızı iyonun yüküne, iyonun cinsine ve uygulanan alanın şiddetine bağlıdır. Elektroforez elektroliz olayının tam tamamlanmamış şeklidir. Çünkü elektroforez işleminde maddeler eletroliz işleminde olduğu gibi kendilerini çeken elektroda kadar gidemeyip yolları üzerindeki bir noktada durdurulmuşlardır. Kromatografik amaçlarla yapılan çalışmalarda elektroforezler bazı desteklere tampon çözeltiler emdirilmek sureti ile destek olan katıda yürütme yapılarak sağlanır. Elektroforezde en çok uygulananı zon elektroforezidir. Zon elektroforezinde katı destek olarak süzgeç kağıdı, selüloz asetat, nişasta jeli, akrilamid jeli gibi stabilize ortamları kullanılır. Elektroforezde doğru akım kullanılır. Amino-asitler izo-elektrik noktada göç oluşturmazlar onun için bu maddelerle yapılacak çalışmalarda farklı pH’da elektroforez uygulanır. İyonik bileşiklerin iyonlaşması elektroforezin temelini oluşturur. Zıt yükteki elektrotlara doğru farklı hızlarla hareket eden değişik yükteki iyonlar elektriksel alanda birbirinden ayrılırlar. Yüksüz kovalent moleküller elektriksel alandan etkilenmezler, farklı iyonlar farklı hızlarla yol alırlar. İyonun büyüklüğü de ayrılmaya etki eder. Büyük iyonların hızı daha yavaştır. Uygulanan gerilim arttırılarak tahlil süresi kısaltılabilir. Ancak ayrımın kötüleşmemesine dikkat edilmelidir. Elektroforezde yüksüz moleküller etkilenmezler, ancak çözücünün sürüklediği kadar bir yer değişimine uğrarlar.
Elektroforezin uygulanışı:Kağıt elektroforezi kağıt kromatografisine benzer. Burada tek fark hazırlanan örnek kağıdın ortasına tatbik edilmesidir. Buna sebepte iyonların iki elektroda doğru hareketi için yeterince yol bırakmaktır. Elektroforez kabının iki bölmesine eşit miktarda tampon çözeltisi doldurulur ve Whatman No:1 kağıdından uygun ölçüde parça kesilerek ortasından kurşun kalem ile çok hafif çizilerek bu çizgi üzerine eşit aralıklarla noktalar konulur. Kağıt tampon çözeltiye batırılarak ıslatılır, işaret noktalara numune bir pipet ile damlatılır ve kağıt elektroforez kabına yerleştirilir. Kağıdın iki ucu iki ayrı bölmedeki tampon çözeltisine iyice daldırılmalıdır. Elektroforez kabının üst kapağı yerine yerleştirilir. Fişler bağlanarak doğru akım kaynağının düğmesi açılır. 30 saniye beklenir ve daha sonra istenen gerilim düğme ile ayarlanır. Elektroforez bittikten sonra akım kesilir, fişler çıkarılır ve üst kapak açılır. Kağıt çıkarılarak hemen kurutulur. Böylece iyonlar kağıt üzerindeki yerlerinde tespit olunur. Daha sonra ayrılan maddeler kağıt ve ince tabaka kromatografisinde olduğu gibi renkli lekeler ve bantlar gibi görünür hale getirilmesi için kimyasal reaktifler püskürtülür.
Elektroforeze etki eden faktörler:İyonların hızına etki eden faktörler; İyonun cinsi, iyonun büyüklüğü, uygulanan alanın şiddeti, elektromigrasyon (göç) (iyonların zıt kutuplara elektrik alan altında yönlenmesidir), elektroosmotik ve difüzyon etkileridir.

alıntı: .......LaboratuarYonetmeligi.doc