HPLC Yöntemiyle Yeşil Çayda Kafein Ekstraksiyonu

Analizi yapılacak olan yeşil çay numunesinden 0.001 hassasiyetle 1 g tartılır ve cam şişeye alınır. Şişedeki çay numunesi üzerine 4,5 g ± 0.5 g MgO ve 300 mL su ilave edilir. Kapağı kapatılır ve 0,1 g hassasiyetle tartılır. Şişe içindekiler karıştırılır. Kapağı kapalı bir şekilde 90˚C’deki su banyosunda 20 dk. sürekli çalkalanarak ısıtılır. Şişe su banyosundan çıkarıldıktan sonra soğutulur, kurulanır ve 0,1 g hassasiyetle tartılır. Soğutulmuş ve kurulanmış şişenin ağırlığı önceki tartıma eşit olmalıdır.
İçindekilerin dibe çökmesi için bekletilir, kapağı açılır ve çözelti 0,45 μm’lik filtreden süzülür. Süzüntünün 1,0 mL’si 10 mL’lik ölçülü balona alınır ve çizgisine kadar su ile tamamlanır. ( Kafeini alınmış ürünler için seyreltme yapılmaz. )

HPLC ( High Performance Liquid Chromotography )

Kromatografi, bir karışımda bulunan bileşenlerin birbirinden ayrılmasını gerçekleştiren ve bu sayede kalitatif ve kantitatif analizlerinin yapıldığı yöntemlerin genel adıdır. HPLC ise bu analizlerin yapıldığı, karşımdaki molekülleri ayırma, o karışımın bileşen yüzdelerini ortaya koyma böylece numune kimliğini belirtme yada safsızlığını derecelendirme amaçlı kullanılan cihaz ve yönteme verilen addır.
Hazırlanan numune HPLC cihazında uygun yöntemlerle analiz edilir ve hesaplanır.

% Kafein içeriği ( m/m ) = (A / C) * B* ( 10*300) / (1*M*1000)* ( 100 / W ) *100

A = Deney çözeltisinin verdiği kafein pikinin alanı
C = Standart kafein çözeltisinin verdiği kafein pikinin alanı
B = Standart kafein çözeltisi B’nin konsantrastonu
M = Deney için kullanılan numunenin kütlesi
W = Deney numunesinin kuru madde içeriği